Болезнь Гамборо представляет серьезную угрозу для промышленного птицеводства, вызывает высокую смертность и потерю продуктивности у цыплят как мясного, так и яичного направления. Применение промежуточных плюсвакцин обеспечивает защиту цыплят от острой и субклинической формы данного заболевания. Для исследования сывороток крови цыплят на наличие антител к вирусу болезни Гамборо уже более 15 лет используют метод ИФА, у которого есть ряд преимуществ, например, быстрота и дешевизна, но главное его достоинство в том, что метод является достоверным и стандартизированным. В этой статье представлены результаты исследования сывороток крови бройлеров методом ИФА в период выращивания (с 1-го по 45-й день).

Защита в течение всего периода выращивания

Одна из основных задач вакцинации против болезни Гамборо - создать защиту цыплят в течение всего периода выращивания. Суточные цыплята защищены от заболевания МА, которые они получили от кур родительского стада. Цыплята-бройлеры становятся чувствительными к вирусу болезни Гамборо к 20-дневному возрасту, а цыплята яичного направления - к 30-дневному. Наличие МА у цыплят в раннем возрасте препятствует их вакцинации, т. к. МА нейтрализуют вакцинный вирус (рис. 1).

Доказано, что при иммунизации цыплят с высоким уровнем МА вакцинный вирус не вызвает сероконверсию. При вакцинации цыплят с критическим уровнем МА (тот уровень МА, который может преодолеть вакцинный штамм) формируется хороший иммунный ответ, предотвращающий клинические и субклинические признаки болезни Гамборо - смертность, геморрагическое воспаление бурсы, снижение показателей продуктивности.
У цыплят в ранний период (рис. 2) снижается средний титр антител, который достигает своего критического значения у цыплят в 12-дневном возрасте (559). Цыплят вакцинировали на следующий день. При серологическом исследовании первые антитела были обнаружены на 4-й день после вакцинации. Средний титр антител достиг своего максимального значения в 26-дневном возрасте (3338) и оставался на высоком уровне вплоть до убоя птицы (3398). Полевой вирус также может вызвать сероконверсию, но в таком случае наряду с последней проявляются клинические признаки и снижается продуктивность цыплят. При оценке титров (рис. 3) антител также очень важно учитывать их однородность. Высокая однородность свидетельствует о хорошем качестве вакцинации цыплят.

Определение даты вакцинации 

Не менее важная задача вакцинации цыплят - создать плавный переход от пассивного иммунитета (МА) к активному. Однако в реальных условиях рассчитать точную дату вакцинации можно только в том случае, если цыплята поступают от одного поставщика и из однородного родительского стада. Сыворотки крови для серологического исследования, как правило, берут у цыплят в течение первых трех дней жизни.
Время вакцинации рассчитывают по формуле «Коухавена» (для бройлерных цыплят) или Девентора (расчет по периоду распада антител).
Данные методы часто используют в лабораториях, т. к. они прилагаются к программному обеспечению оборудования. Дата вакцинации, определенная таким образом, должна подтверждаться ветеринарным специалистом или руководителем, в соответствии с реальной ситуацией на фабрике.
В данном опыте цыплят иммунизировали вакциной Cevac® IBD L методом выпаивания в 13-дневном возрасте (Сева Санте Анималь, Либурн, Франция). Средний титр антител у цыплят перед вакцинацией в 12-дневном возрасте составил 559, причем большее количество проб (8) находилось в первой группе с титром антител от 0 до 396 (рис. 4). Коэффициент вариации 97%. Цыплят иммунизировали однократно промежуточной плюс вакциной Cevac® IBD L, т. к. она преодолевает уровень МА в разведении 1:500.

Сероконверсия и продолжительность циркуляции антител

При исследовании образцов сывороток крови у цыплят в 26-дневном возрасте (через 2 нед после вакцинации) отмечали высокую и однородную сероконверсию (рис. 5), с коэффициентом вариации 32%. Положительным титром антител против болезни Гамборо принято считать от 1000 до 2000. В данном исследовании средний титр антител составил 3338 и все пробы были положительными. Результаты исследования методом ИФА зависят от многих условий - типа набора, навыков оператора, внешних условий постановки реакции (температура, влажность). Сравнивать результаты исследований можно лишь в том случае, если они были выполнены одновременно, одним оператором и с использованием наборов одного производителя.

Однородность титров антител можно оценить по коэффициенту вариации (см. рис. 5). На диаграмме представлены образцы сывороток крови, которые распреде лены по группам: от 0 до 395, от 396 до 999, от 1000 до 1999 и т. д. Условно принято считать, что для статистически достоверных результатов при выполнении ИФА необходимо отбирать от 18 до 23 (18 минимум) образцов сывороток крови [2, 11]. Информация в форме диаграммы позволяет оценить расположение титров по группам (большинство образцов в одной группе или образцы распределены по нескольким группам) и по отношению к среднему значению (гетерогенные или гомогенные титры). При исследовании сывороток крови суточных цыплят (см. рис. 3) большинство титров антител располагались в одной группе и были близки к среднему значению.

Хорошая однородность и высокий уровень МА свидетельствует об удовлетворительном состоянии здоровья родительского поголовья и о правильной программе вакцинации кур до начала яйцекладки с использованием живых и инактивированных вакцин.

Во многих исследованиях отмечена положительная корреляция между реакцией вирус нейтрализации и методом ИФА [1, 4, 5, 7, 8]. Кроме того, различия в средних титрах между двумя группами цыплят, привитых разными вакцинами, не всегда свидетельствует об иммуногенности вакцины. Например, среднее значение титра антител 3000 у цыплят 25-дневного возраста, иммунизированных вакциной А, и 4500 у цыплят, привитых вакциной Б, не говорит о том, что иммунизация лучше при использовании вакцины Б. Можно лишь сказать о том, что цыплята обеих групп были успешно иммунизированы. Различия в среднем значении титра могут быть вызваны различиями в наборах или другими условиями. По значению среднего титра можно оценивать качество вакцинации (плохое или хорошее), но не сравнивать разные вакцины. При ИФА самым существенным критерием для оценки результатов служит однородность титров, которая зависит, главным образом, от качества вакцины, условий ее транспортировки и хранения, техники вакцинации цыплят. Для проверки качества вакцинации можно провести дополнительное исследование образцов сыворотки крови у цыплят 45-дневного возраста. В приведенных исследованиях средний титр антител у цыплят 45-дневного возраста составил 3398 (рис. 6) с коэффициентом вариации 23% (высокая однородность).

Заключение

ИФА является широко распространенным методом оценки иммунного статуса поголовья и позволяет, на основании среднего титра антител и однородности титров, рассчитывать дату вакцинации цыплят против болезни Гамборо. Посредством ИФА можно также оценивать качество вакцинации, при этом особое внимание необходимо обращать на однородность титров антител.

*Сокращения: ИФА (ELISA) — иммуноферментный анализ, МА — материнские антитела